大鼠(rat, Rattus norvegicus)性情不够温顺、易受惊,受惊后表现凶恶,易咬人。大鼠怕酷热和寒冷,尤其怕闷热。繁殖快,大鼠2月龄时性成熟,性周期4天左右,妊娠期20(19~22)天,哺乳期21天。成年大鼠一般体长为16~21厘米,体重约250~450克,雄鼠较大,毛色纯白,被毛致密紧披有光泽,头面尖突,嘴脸前部有较硬的触毛,眼大明亮,虹膜呈粉红色,见图1。
常用的大鼠近交品系有十几个如:ACI、BVF、F344、PA、M520、WAB、WAC、WKA、SD、RF等品系。常用的非近交的纯种大鼠有7种,其中以Wistar大鼠用得最多。
常用的大鼠近交品系有十几个如:ACI、BVF、F344、PA、M520、WAB、WAC、WKA、SD、RF等品系。常用的非近交的纯种大鼠有7种,其中以Wistar大鼠用得最多。
图1 SD大鼠
大鼠免疫球蛋白与其他哺乳动物的免疫球蛋白相似,大鼠有五种抗体同种型(IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。其中IgG在大鼠中有四个亚型:IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c,其中IgG2a,IgG2b在血清含量较高.大鼠与人血清中抗体类型含量差异较大:IgM含有0.5-3.3mg/ml;IgA含有0.6-3.1mg/ml;IgE含有24-430mg/ml;总IgG含有6.1-13.0mg/ml,IgG1约为9mg/ml、IgG2约为3mg/ml、IgG3约为1mg/ml和IgG4约为0.5mg/ml,见表1。
表1 大鼠抗体亚型及基因信息
大鼠的IgG1和IgG2a与小鼠IgG1相似;大鼠的IgG2b相当于小鼠IgG2a/IgG2b;大鼠的IgG2c相当于小鼠的IgG3,相似性见表2;
大鼠轻链可变区基因座比小鼠复杂得多在同品系的大鼠体内和之间可以观察到同种异型的显著差异。同时,大鼠IgG2b对人Fc G受体(包括NK细胞上的受体)具有特别高的亲和力。与IgM、IgG2b、IgG2c或IgG2a相比,IgG1型大鼠抗体复合物显示出较低的补体激活能力,其中IgG2a在补体中最有效。
表2 小鼠和大鼠IgG亚类恒定区的蛋白质序列相似性比较
使用大鼠作为免疫动物,它比兔子便宜得多,需要的抗原量也少得多(每只动物少于1mg),可作为大鼠免疫原有天然或者重组蛋白质、合成多肽、糖类物质、核酸、脂质和许多其他天然或合成的化合物见表3。特别是抗原小分子化合物在大鼠中具有较好的免疫反应性。
表3 常用免疫原
由于小鼠抗体对小鼠本身基因抗原的耐受性,很少利用小鼠产生抗小鼠抗原的抗体,大鼠是开发抗小鼠抗原较好的选择,也非常适合产生抗小鼠抗原的多克隆抗体:
(1)大鼠与小鼠的抗体库不同,对于某些抗原,大鼠免疫反应性比小鼠更优异。特别是大鼠物种对化合物和小分子(如毒素和类固醇)、表观遗传变化、新表位、跨膜蛋白等具有高反应性。
(2)大鼠免疫球蛋白的物理化学和生物学特性相关,大鼠IgG1、IgG2a和IgG2b亚类的抗体可以结合人和兔的补体。
(3)鼠单克隆抗体产量高,在LOU/C大鼠中获得的腹水体积约为小鼠的10倍,并且每只动物获得100至150mg纯化抗体。
(4)大鼠免疫需要较少的抗原量,对有限的抗原制备抗体具有重要意义。
(5)大鼠抗体在小鼠抗原的免疫检测中交叉反应较弱。
(6)可以使用不同的免疫路线(尾静脉、脚垫等、皮下、肌肉),采血量远大于小鼠。
大鼠多抗应用
大鼠多克隆抗体可以识别多个抗原表位,具有广泛的免疫学检测中应用场景:
斑点印迹法(Dot blot)
酶免疫测定(EIA, Enzyme Immunoassay)
电化学发光(Electrochem, Electrochemiluminescence)
酶联免疫吸附试验(ELISA, Enzyme-linked immunosorbent assay)
酶联免疫吸附斑点(ELISpot, Enzyme-linked immunosorbent spot)
免疫电镜(EM, Immuno-electron microscopy)
流式细胞术/细胞分选(FC/FACS, Flow cytometry/Cell sorting)
免疫细胞化学(ICC, Immunocytochemistry)
免疫荧光(IF, Immunofluorescence)
冰冻免疫荧光(IF-Fr, Immunofluorescence-frozen)
石蜡免疫荧光(IF-P, Immunofluorescence-paraffin)
免疫组织化学(IHC, Immunohistochemistry)
免疫沉淀(IP, Immunoprecipitation)
免疫印迹(WB, Western Blotting)
服务特色
(1)全面评估免疫原,选择最佳抗原制备方案
(2)依据客户需求,设计个体化抗体制备流程
(3)多种免疫方案、佐剂,快速、高效提供抗体效价
(4)丰富的抗原选择与多途径免疫相结合
(5)从抗原设计、抗体制备、抗体配对到抗体纯化的一站式服务
西安迈博睿生物(Mabioway)在抗体定制领域研究多年,我们拥有专业的抗体制备技术人员、完善的抗体生产设备、先进的抗体制备技术,可以为客户提供个体化的大鼠多克隆抗体制备服务,包括抗原设计、合成,动物免疫和抗体纯化、鉴定。如您对大鼠多克隆抗体定制感兴趣或者需要技术支持,请您与我们联系,根据需求提供方案和报价,我们免费提供项目咨询及评估。
表1 大鼠抗体亚型及基因信息
Isotypes | Subclasses | NCBI | IMGT | Serum Con. (mg/ml) |
IgA | 314487 | IGHA | 0.05 | |
IgD | 641523 | IGHA | 0.008 | |
IgE | 299351 | IGHE | 0.0001 | |
IgG | IgG1 | 299354 | IGHG1 | 1.48 |
IgG2a | 679045 | IHG2A | 2.38 | |
IgG2b | P20761 | IGHG2B | 2.61 | |
IgG2c | 362795 | IGHG2C | 1.4 | |
IgM | 299357 | IGHM | 0.83 |
大鼠轻链可变区基因座比小鼠复杂得多在同品系的大鼠体内和之间可以观察到同种异型的显著差异。同时,大鼠IgG2b对人Fc G受体(包括NK细胞上的受体)具有特别高的亲和力。与IgM、IgG2b、IgG2c或IgG2a相比,IgG1型大鼠抗体复合物显示出较低的补体激活能力,其中IgG2a在补体中最有效。
表2 小鼠和大鼠IgG亚类恒定区的蛋白质序列相似性比较
Rat IgG subclass | Mouse | Rat | Sequence identity | Sequence similarity |
IgG1 | P01868 | P20759 | 81.00% | 92.00% |
IgG2a | P01863 | P20760 | 65.00% | 79.00% |
IgG2b | P01867 | P20761 | 73.00% | 83.00% |
IgG2c | P03987(IgG3) | P20762 | 79% | 87% |
表3 常用免疫原
分类 | 抗原种类 | 优势 |
小分子 | 目标分子与BSA、OVA等载体蛋白偶联 | 偶联制备方案多样 |
多肽 | 预测免疫优势表位,多肽合成及KLH偶联 | 性价比高,制备便捷 |
磷酸化、乙酰化、甲基化等多肽合成及偶联 | 位点特异性准确,设计合成方便 | |
重组蛋白 | 大肠杆菌表达、昆虫杆状系统、哺乳动物细胞、天然提取 | 表达体系成熟,应用范围广泛,可以大规模生产 |
天然蛋白 | 裂解物、纯化蛋白 | 保留天然抗原结构表位,抗原丰度高 |
细胞 | 转染细胞系、天然细胞系 | 保留抗原天然结构、正确的天然修饰与折叠 |
基因免疫 | 目标基因载体构建与质粒大提 | 价格便宜,制备方便,目标蛋白体内表达,折叠正确,糖基化与转录后修饰完备 |
(1)大鼠与小鼠的抗体库不同,对于某些抗原,大鼠免疫反应性比小鼠更优异。特别是大鼠物种对化合物和小分子(如毒素和类固醇)、表观遗传变化、新表位、跨膜蛋白等具有高反应性。
(2)大鼠免疫球蛋白的物理化学和生物学特性相关,大鼠IgG1、IgG2a和IgG2b亚类的抗体可以结合人和兔的补体。
(3)鼠单克隆抗体产量高,在LOU/C大鼠中获得的腹水体积约为小鼠的10倍,并且每只动物获得100至150mg纯化抗体。
(4)大鼠免疫需要较少的抗原量,对有限的抗原制备抗体具有重要意义。
(5)大鼠抗体在小鼠抗原的免疫检测中交叉反应较弱。
(6)可以使用不同的免疫路线(尾静脉、脚垫等、皮下、肌肉),采血量远大于小鼠。
大鼠多抗应用
大鼠多克隆抗体可以识别多个抗原表位,具有广泛的免疫学检测中应用场景:
斑点印迹法(Dot blot)
酶免疫测定(EIA, Enzyme Immunoassay)
电化学发光(Electrochem, Electrochemiluminescence)
酶联免疫吸附试验(ELISA, Enzyme-linked immunosorbent assay)
酶联免疫吸附斑点(ELISpot, Enzyme-linked immunosorbent spot)
免疫电镜(EM, Immuno-electron microscopy)
流式细胞术/细胞分选(FC/FACS, Flow cytometry/Cell sorting)
免疫细胞化学(ICC, Immunocytochemistry)
免疫荧光(IF, Immunofluorescence)
冰冻免疫荧光(IF-Fr, Immunofluorescence-frozen)
石蜡免疫荧光(IF-P, Immunofluorescence-paraffin)
免疫组织化学(IHC, Immunohistochemistry)
免疫沉淀(IP, Immunoprecipitation)
免疫印迹(WB, Western Blotting)
服务特色
(1)全面评估免疫原,选择最佳抗原制备方案
(2)依据客户需求,设计个体化抗体制备流程
(3)多种免疫方案、佐剂,快速、高效提供抗体效价
(4)丰富的抗原选择与多途径免疫相结合
(5)从抗原设计、抗体制备、抗体配对到抗体纯化的一站式服务
西安迈博睿生物(Mabioway)在抗体定制领域研究多年,我们拥有专业的抗体制备技术人员、完善的抗体生产设备、先进的抗体制备技术,可以为客户提供个体化的大鼠多克隆抗体制备服务,包括抗原设计、合成,动物免疫和抗体纯化、鉴定。如您对大鼠多克隆抗体定制感兴趣或者需要技术支持,请您与我们联系,根据需求提供方案和报价,我们免费提供项目咨询及评估。