单克隆抗体腹水生产,一般是将杂交瘤细胞接种于同系小鼠或裸鼠腹腔内,经一定时间,动物腹腔内产生含单克隆抗体的腹水。该方法在设备、工艺等方面要求相对低一些,生产成本低, 适用于少量小鼠单克隆抗体的制备,是目前用于体外使用抗体的主要来源途径。
小鼠腹腔中有大量巨噬细胞,易吞噬注入的杂交瘤细胞,一般在注射细胞前用诱导剂(降植烷、不完全佐剂、石蜡油)处理腹腔,抑制巨噬细胞活性,对细胞及免疫组织有增强效应,且毒性小,同时产生的杂交瘤细胞生长因子IL-6等释放,也可以加速杂交瘤细胞的增殖,提高腹水抗体含量和质量。
迈博睿(Mabioway)具有丰富的腹水生产抗体经验,可以提供克级别的产能,公司优化的腹水诱导剂及致敏方案,可以缩短产生腹水时间,同时提高单只小鼠的腹水产量。
表1 腹水生产抗体服务详情
步骤 | 服务内容 | 周期 |
1.细胞系邮寄、复苏和扩增 | 客户提交: 1.邮寄2管冷冻(冻存时间1年以内)杂交瘤细胞 2.提交的杂交瘤细胞培养基配方 3.杂交瘤细胞系来源的物种名称 4.提交的杂交瘤细胞系的开发记录(如果有) 注意:收到上述材料和信息后,将回收杂交瘤细胞系并检查是否有污染。如果未检测到污染,将扩增细胞系以产生足够的细胞用于小鼠接种。 | 1-2周 |
2.动物致免 | 1.致敏剂:降植烷(PRISTANE)、不完全佐剂(IFA)、石蜡油(Paraffin oil),提前一周注射0.3ml/只; 2.使用动物:Balb/c、裸鼠、SCID鼠、F1鼠(雄性Balb/c与雌性SW/HPB); 3.周龄:10-12周; 4.细胞用量:2*106Cells/只; 5.出现腹水时间:7-10天; | 2-3周 |
3.腹水收集、纯化 | 1.使用2.5ml注射器,收取腹水; 2.离心收集和澄清腹水; 3.腹水等分并立即冷冻或纯化; | 1周 |
腹水生产抗体的优点:
(1)小鼠腹腔内有自然吞噬作用, 可以避免污染等造成杂交瘤细胞生长不良;
(2)小鼠腹腔本身为杂交瘤细胞的良好培养环境, 可使杂交瘤细胞始终处于对数生长状态;
(3)腹水中分离出的杂交瘤细胞的生长能力与分泌抗体能力, 都强于组织培养的杂交瘤细胞;
(4)抗体含量高达2-10mg/ml,单只小鼠可以收集3-10ml腹水。