| 名称 | FITC |
| 同名词/中文名 | 异硫氰酸荧光素酯;Fluorescein5-isothiocyanate；异硫氰酸荧光素酯；荧光素-5-异氰酸酯 |
| 纯度 | 98.77% |
| 包装1 | 1mg |
| 包装2 | 5mg |
| 简介 | FITC，英文全称 Fluorescein Isothiocyanate，中文名称异硫氰酸荧光素，是生物学中应用最为广泛的一种绿色荧光素衍生物。FITC 具有高吸收率、优良的荧光量子产率和良好的水溶性等特点。FITC 的异硫氰酸基团可与蛋白质上的氨基、巯基、咪唑、酪氨酰、羰基等基团相结合，从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。FITC 除了用作蛋白质标记物，还可用作蛋白质荧光示踪剂，通过标记抗体而快速鉴定病原体，或是用于蛋白质和多肽（HPLC）的微量测序。FITC 的最大激发波长为 494 nm。一旦激发，在最大发射波长 520 nm 处呈黄-绿色荧光。 |
| 制备 | 1. 蛋白准备 为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 1 mg/mL。 1) 蛋白溶液PH值应为 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。 2) 若蛋白浓度低于 1 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 1-10 mg/mL。 3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。 2. 染料准备 将无水二甲基亚砜加入 FITC 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液，震荡摇匀。 注：FITC 要现配现用，避光。 3. 染料用量计算 标记反应所需的 FITC 用量取决于要标记蛋白的用量，FITC 与蛋白的最佳质量比为 1：50 左右。 例：假如所需标记蛋白为 1 mL，2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000)，用 1 mL DMSO 溶解一管 1 mg FITC，则所需 FITC 体积为 40 μL。 使用说明 1. 标记反应 1) 取算好体积的新鲜配制的 50 μL FITC 缓慢加入到 1 mL 蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。 2) 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 8 h，每隔 30 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。 3) 加入 5 M 的 NH4Cl 至终浓度 50 mM，4℃ 终止反应 2 h。 2. 蛋白纯化脱盐 以下方案以使用 Sephadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例。 1) 按照生产说明书制备 Sephadex G-25 柱。 2) 将反应混合物装入Sephadex G-25 色谱柱顶部。 3) 当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。 4) 向所需样品中加入更多的PBS (pH 7.2-7.4)，完成柱纯化。结合物含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。 注意事项 1. FITC 对光及湿度敏感。即用即配 FITC 溶液并丢弃未使用的部分。 2. 低浓度的叠氮化钠 (≤3 mM 或 0.02％) 或硫柳汞 (≤0.02 mM 或 0.01％) 不会显著干扰蛋白标记；但是 20-50％ 的甘油会降低标记效率。 3. 避免使用含伯胺 (例如 Tris，甘氨酸) 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白竞争反应。 4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
| 分子量 | 389.38 |
| 性状 | Solid |
| 分子式 | C21H11NO5S |
| Em | 488 |
| Ex | 525 |
| 运输条件 | 常温，避光，冰袋运输 |
| 储存方式 | -20°C，避光 |
| 溶解方式 | DMSO 中的溶解度 : 50 mg/mL ；H2O 中的溶解度 : < 0.1 mg/mL (insoluble) |
| 标记对象 | 氨基 |
| 反应原理 |  |
| CAS | 27072-45-3（混合） 3326-32-7（5-异构体） 18861-78-4（6-异构体） |
