阳性对照抗体-抗药物检测方法开发 (ADA) MAT-0020
可靠的阳性对照对于药物研发至关重要。
抗药物抗体（ADA）检测简介：
抗药物抗体检测，有时也称为“免疫原性”检测，通常简称为“ADA”，需要定制开发阳性对照抗体。这种阳性对照抗体是生物药物候选物药物开发过程中至关重要的试剂。
生物制剂通常是抗体，但也可能是蛋白质、融合蛋白、细胞因子、基因治疗蛋白产品和细胞疗法。阳性对照在评估给药后生物制剂的免疫反应时，可作为参考试剂。宿主（动物或人）产生针对给药后生物制剂的抗体可能产生不良后果。这些不良后果包括干扰生物制剂的预期作用机制、生物制剂被完全中和或宿主产生过度活跃的免疫反应。对治疗性蛋白产品（生物制剂）的免疫反应有可能影响其药代动力学、药效学、安全性和有效性。
FDA指南和建议
美国食品药品监督管理局（FDA）发布了抗药物抗体检测方法的开发和验证指南，以支持生物制剂的研发。FDA将免疫原性定义为“治疗性蛋白质产品产生针对自身及相关蛋白质的免疫反应，或诱发免疫相关不良临床事件的倾向”。
FDA的指导原则基于“三级方法”。在该方法中，首先对样本进行筛选试验。初筛结果呈阳性的样本随后进行确认试验，以证明抗药抗体（ADA）特异性针对治疗性蛋白产品。确认试验结果呈阳性的样本应通过其他试验进行进一步表征，例如滴定试验和中和试验。
免疫原性评估的三个层级
图 1.免疫原性评估的三个层次。
阳性对照的生成
FDA就如何制备用于开发和验证ADA检测的阳性对照品提出了建议。FDA建议通过免疫动物（通常是兔子）来制备阳性对照品。FDA还建议对所得血清进行针对免疫原（治疗性蛋白）的亲和纯化。这种方法可以浓缩和纯化多克隆抗体，从而有助于更好地解读检测的灵敏度限值。
免疫接种和采血时间表
图 2.典型的免疫接种和采血方案。
免疫接种和采血计划（续）
表 1.第 42 天的典型滴度测试数据。所有兔子都对人类 IgG 免疫原产生了强烈的反应。
亲和纯化
图 3.我们针对人类 IgG 免疫原的亲和纯化策略。
桥接检测形式
ADA 筛查检测通常采用“桥接”模式。桥接检测通常以均相检测的方式进行——将试剂混合于溶液中，孵育，然后捕获免疫复合物并生成读数。这些检测可使用多种免疫分析平台进行，包括 ELISA、Meso Scale Discovery (MSD) 和 Gyros。
图 4.用于检测抗药物抗体的桥接式检测方法示意图。用于生成阳性对照的免疫原是一种生物候选药物。在本例中，免疫原的一部分用生物素标记，另一部分用辣根过氧化物酶 (HRP) 标记。
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