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膜蛋白纯化的纳米盘法

膜蛋白纯化纳米盘法

简要描述:

纳米盘的结构与去污剂胶束非常相似。它由130-160个脂质组成,这些脂质以双层方式排列,并通过称为膜支架蛋白(MSP)的两亲性蛋白质连接在一起。这使其在稳定性和

产品参数:

详细介绍

纳米盘的结构与去污剂胶束非常相似。它由130-160个脂质组成,这些脂质以双层方式排列,并通过称为膜支架蛋白(MSP)的两亲性蛋白质连接在一起。这使其在稳定性和溶解性方面比去污剂更具优势。在该方法中,使用温和的去污剂和纳米圆盘瞬间溶解目标蛋白。去除去污剂后,进行进一步的操作,将目标膜蛋白密封在纳米圆盘组件中。这种排列方式模拟了自然状态,从而在单分子水平上具有更高的稳定性。

一些对去污剂敏感的膜蛋白不适用于含去污剂的缓冲液,导致它们无法纯化、易降解或失活。对于这类膜蛋白,可以采用纳米圆盘技术进行纯化。纳米圆盘的结构与去污剂胶束非常相似,由130-160个以双层方式排列的脂质组成,这些脂质通过称为膜支架蛋白(MSP)的两亲性蛋白质连接在一起。其结构类似于体内饼状的高密度脂蛋白(HDL) ,MSP蛋白的疏水残基位于螺旋内侧,通过疏水相互作用与磷脂分子的疏水尾结合。与去污剂相比,纳米圆盘具有更好的稳定性和溶解性,可以使蛋白质的排列更接近天然状态,在单分子水平上具有更高的稳定性。

对于许多系统和项目来说,直径约10纳米的平面双层模型系统(例如纳米圆盘)是理想的选择,它为一种或多种膜蛋白提供了空间,并允许从两侧进入以分析信号传导事件。大量研究已证明纳米圆盘是分离膜蛋白以及研究其与其他蛋白质和脂质复合物的结构和功能的重要工具。

图 1. 纳米盘中瑞诺丁受体的结构,通过低温电子显微镜解析至 ∼6.1 Å

6.1 Å(Denisov, IG; Sligar, SG 2016)

服务

迈博睿生物建立的纳米盘技术平台可以将膜蛋白整合到双层膜中以维持其结构和活性的项目提供了技术支持。我们根据客户需求提供多种不同的解决方案:

  • 纳米圆盘系统与无细胞表达系统相结合

将预组装的纳米圆盘添加到无细胞系统中。预组装的纳米圆盘以整合的新生膜蛋白混合物的形式提供。此过程中无需添加去污剂。可选地,可以添加生物素化或同位素标记等修饰。

  • 直接从膜中溶解

将去污剂和膜支架蛋白添加到表达目标蛋白的膜上,膜磷脂、膜蛋白和膜支架蛋白将组装形成纳米圆盘复合物。然后可以通过亲和层析纯化单个膜蛋白-纳米圆盘复合物。

  • 洗涤剂溶解蛋白质的重构

将合适的去垢剂、膜支架蛋白和磷脂添加到纯化的膜蛋白中。含有膜蛋白的纳米圆盘会自发组装,并可通过亲和层析或尺寸排阻层析进行纯化。


我们的膜蛋白研究专家可以测试和优化脂质与支架蛋白的摩尔化学计量,并选择支架蛋白与膜蛋白的大小和比例,以有利于将主要单体或寡聚靶标掺入纳米圆盘中。

迈博睿生物在膜蛋白纯化领域积累了丰富的经验。我们专业的技术团队能够为客户提供高质量的纳米技术及一系列相关的特色服务。我们极具竞争力的价格和丰富的专业知识赢得了合作伙伴的信任。


 


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