背景
介绍
膜蛋白在信号转导、运输和细胞间通讯等细胞功能中起着核心作用，但由于其疏水性和对脂质环境的依赖性，研究它们的相互作用仍然具有挑战性。传统的共免疫沉淀 (co-IP) 或荧光共振能量转移 (FRET) 方法常常难以解决溶解性问题，并且无法模拟天然膜条件。基于膜的酵母双杂交 (MbY2H) 系统克服了这些局限性，能够在真实的膜环境下进行相互作用分析，保留了对功能至关重要的蛋白质构象和修饰。
由于膜蛋白占治疗靶点的 60% 以上，MbY2H 在药物发现中起着关键作用，特别是对于与受体、通道和转运蛋白相关的疾病。
利用我们的服务推进您的研究
图1. MYTH系统的重要元素。(Snider等人，2010)
工作原理
1. 分裂泛素系统原理
MbY2H 系统采用分裂泛素互补分析。Cub（C 端泛素）和突变的 Nub（N 端泛素）片段仅在诱饵-猎物相互作用使它们接近时才会重建功能性泛素，从而能够精确检测膜蛋白相互作用。
2. 诱饵和猎物蛋白融合
诱饵（膜蛋白）与 Cub 和人工转录因子 (TF) 融合，而猎物则与低亲和力的 Nub 连接。这种设计最大限度地减少了 Cub-Nub 的自发结合，确保了相互作用依赖的泛素重组，并降低了假阳性率。
3. 转录因子释放和记者激活
泛素重建会募集蛋白酶将转录因子 (TF) 从诱饵上裂解下来。释放的转录因子进入细胞核，激活报告基因（例如HIS3）进行选择性生长或酶促读取，从而实现高通量相互作用筛选。
4. 可视化工作流程概述
关键步骤包括将诱饵/猎物克隆到 Cub-TF/Nub 载体中、共转化酵母、选择性培养以消除非相互作用物，以及通过报告基因激活来量化相互作用 - 这对于疏水性或低丰度膜靶标来说是理想的。
5.技术优势
该系统在活酵母中运行，保留了天然膜环境和翻译后修饰。它支持GPCR、转运蛋白和疾病相关靶点的研究，连接功能蛋白质组学和药物研发。
我们服务的应用
| 类型 | 关键点 | 描述 |
| 药物靶点识别 | 通过膜蛋白相互作用识别新的药物靶点。 | 通过筛选膜蛋白的相互作用来确定潜在的药物靶点。 |
| 通路阐明 | 绘制涉及膜蛋白的信号通路图。 | 通过识别膜蛋白的相互作用网络来绘制信号通路图。 |
| 疾病研究 | 研究膜蛋白在疾病机制中的作用。 | 通过探索与疾病相关的膜蛋白的相互作用来研究疾病机制。 |
| 农业研究 | 通过膜蛋白相互作用增强作物特性。 | 通过识别膜蛋白的相互作用来改善作物特性。 |
| 功能基因组学 | 探索各种生物体中膜蛋白的相互作用组。 | 使用 MbY2H 识别膜蛋白的大规模相互作用网络。 |
| 高通量筛选 | 有效筛选膜蛋白相互作用。 | 筛选大型 cDNA 文库以识别新的膜蛋白相互作用。 |
服务流程
样品提交要求
我们非常高兴能通过基于膜的酵母双杂交筛选服务帮助您探索蛋白质相互作用！为了顺利开始，请您提供以下信息和样品：
- 目标蛋白信息
请提供您的目标蛋白的基因序列，包括 cDNA 序列。如果您有任何背景信息或具体要求，请随时告知我们。这将有助于我们根据您的需求定制服务。 - 诱饵载体（可选）
如果您已经构建了诱饵载体，请将其发送过来。如果没有，不用担心，我们可以帮您构建！只需提供引物设计所需的基因片段信息即可。 - cDNA 文库选择
我们提供一系列标准化 cDNA 文库供您选择。如果您有自定义文库，请告知我们，我们也很乐意为您提供服务！ - 样本质量：
对于 DNA 样本，请确保其纯度高，浓度≥50 ng/µL。如果您提交的是蛋白质样本，请确保其具有活性且纯度高。如有任何疑问，请随时联系我们，我们将竭诚为您服务！ - 附加详细信息
有关您的目标蛋白质的任何额外信息，例如已知的相互作用或特定的筛选条件，都将对我们优化流程非常有帮助。
交付
- 详细筛选报告
- 阳性克隆序列和 BLAST 结果
- 高通量测序分析
- 可选验证数据（Co-IP、Pull-down）
- 标准时间：8-10周
- 加急时间：6-8周
服务范围
| 诱饵载体构建 | 图书馆筛选 | 自激活测试 | 阳性克隆鉴定 | 反向转换和验证 | 定制解决方案 |
| 诱饵载体构建的引物设计、基因扩增和克隆验证服务。 | 使用标准化或定制 cDNA 文库进行高通量筛选。 | 对诱饵载体进行自激活测试以确保其功能性。 | 通过 PCR、测序和 BLAST 比对识别阳性克隆，并提供相互作用伙伴的信息。 | 进行反向转换和验证实验以确保结果的可靠性。 | 定制服务包括特殊蛋白质筛选的优化和全面的技术支持。 |
为什么选择迈博睿生物？
专注于膜蛋白研究
我们的团队擅长膜蛋白相互作用研究，利用MbY2H系统解决蛋白质溶解度和天然构象保存等难题。这些专业知识确保了GPCR和离子通道等靶标的可靠结果。
量身定制的端到端解决方案
我们会根据您的需求调整工作流程——无论是分析单个相互作用还是大规模网络。服务涵盖诱饵设计、文库筛选和数据分析，支持多种物种和膜蛋白类型。
质量驱动，价格实惠
极具竞争力的价格与严格的质量检验相结合，包括对每一次相互作用进行三重验证（基因、生化和功能）。透明的报价，无任何隐藏费用，让您安心规划。
每一步都建立忠诚的合作伙伴关系
指定项目经理将全程指导您完成从规划到最终报告的整个过程，并提供实验优化和故障排除方面的宝贵建议。我们优先确保研究成果与您的研究时间表相符。
清晰的更新和更快的结果
通过我们的客户门户实时跟踪进度，并每两周接收一次摘要。我们优化的流程比行业标准时间线快 25%，加速您的发现。
