酵母单杂交技术最早由李建军等于1993年从酵母双杂交技术发展而来。该技术通过对报告基因进行表型检测,分析DNA与蛋白质之间的相互作用,从而研究真核细胞中基因表达的调控。由于酵母单杂交方法在检测特定转录因子与顺式作用元件之间的特异性相互作用方面灵敏度高、可靠性高,因此被广泛应用于克隆含量稀少、难以通过生化手段纯化的特定转录因子。
酵母单杂交是一种克隆与靶元件特异性结合的转录因子基因(cDNA)的有效方法,其原理是DNA结合蛋白(转录因子)通过与DNA顺式作用元件结合来调控报告基因的表达。其理论基础是:许多真核生物的转录激活因子由物理上和功能上独立的DNA结合结构域(BD)和激活结构域(AD)组成,因此可以构建各种基因与AD的融合表达载体,从而筛选出与靶元件具有特异性结合区域的蛋白质。理论上,在单杂交检测中,任何一个靶元件都可以用来筛选具有特异性结合区域的蛋白质。
酵母单杂交的应用:
- 确定已知DNA与蛋白质是否存在相互作用;
- 筛选与目标顺式调控元件或其他短DNA序列链接的新基因;
- 识别蛋白质结合DNA的结构域,准确定位与DNA结合的蛋白质序列。
实验工作流程:
- 库的建立与筛选
- 蛋白质-蛋白质相互作用验证
- 自激活和毒性验证
- 酵母质粒提取和测序
迈博睿生物基于酵母单杂交技术, 建立了以转录因子为中心识别其识别元件的技术。该技术能够准确、快速、简便、高效地识别转录因子识别的元件,在蛋白质与DNA元件相互作用的研究中具有广阔的应用前景。如果您对我们的酵母单杂交筛选服务感兴趣,迈博睿生物期待与您的合作。