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单 B 细胞抗体技术的真相

发布时间:2020-07-21 14:25:46 点击次数:

单 B 细胞抗体技术是开发单克隆抗体 (mAb) 的一种相对较新的方法。与传统 mAb 技术相比,它具有多种优势,包括更短的时间、更高的通量以及与人工智能 (AI) 驱动的亲和力成熟的兼容性。

传统单克隆抗体技术的局限性

单克隆抗体传统上通过两种主要途径生产。杂交瘤技术涉及用感兴趣的抗原对小鼠或兔子进行免疫,分离 B 细胞以与骨髓瘤融合,并淘选特定的抗体克隆。尽管杂交瘤技术仍然被广泛使用,但它的工作流程很长,并且由于细胞融合效率有限,可能会遭受多样性的损失。

 

噬菌体展示使用表面结合的抗原来捕获溶液中表达不同抗体单链可变片段 (scFv) 的噬菌体。然后在大肠杆菌中洗脱并扩增任何抗原特异性噬菌体以评估 scFv,通过添加恒定结构域将高亲和力结合物转化为全长抗体。虽然噬菌体展示比杂交瘤技术更有效,但它产生的抗体中重链和轻链不是自然配对的。


单B细胞抗体技术的优势

单 B 细胞抗体技术是一种新开发的 mAb 发现和开发方法。与杂交瘤技术一样,它首先用目标抗原对小鼠或兔子进行免疫。然而,随后收集脾细胞和外周血单核细胞 (PBMC) 进行荧光激活细胞分选 (FACS),以分离任何分泌抗体的 B 细胞。

FACS 分离后,可直接裂解 B 细胞进行基因扩增。或者,可以在体外扩增B细胞并使用ELISA或FACS测定法分析细胞培养物上清液。一旦选择了任何阳性克隆,抗体可变基因就会被扩增。然后抗体在哺乳动物细胞系中重组表达并得到充分验证。

 

与杂交瘤技术相比,单 B 细胞抗体技术的主要优点是时间更短、通量更高。而且,与噬菌体展示相比,它产生具有天然重链和轻链对的单克隆抗体。此外,由于单 B 细胞抗体技术保留了抗体库的天然多样性,因此可以增加针对更具挑战性的靶标生成 mAb 的可能性,例如难以在体内模拟的构象决定

 

获取单 B 细胞抗体技术

单 B 细胞抗体发现平台涵盖从抗原生成、免疫、单 B 细胞筛选到 B 细胞克隆、抗体表达和验证的一切。通过将所有必要的技术集中于一处,抗体发现时间可以从几个月缩短到几周。

在B细胞筛选阶段,应用了多个平台。其中包括 FACS、基于珠子或荧光共振能量转移 (FRET) 的技术,以及称为Beacon 的单 B 细胞抗体发现平台,该平台旨在加速各种细胞处理和分析应用,包括 mAb 发现。Beacon 以 FACS 为中心,采用光电定位 (OEP™) 技术将单个 B 细胞放置在离散的室中进行自动筛选。在 mAb 发现环境中,与使用传统杂交瘤技术的一到两个月相比,这将筛选过程缩短至一天,并且一次性实现了 >10,000 个 B 细胞的显着更高的通量。


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